Преаналитический этап: правила забора материала
Грамотный забор крови — критический фактор успеха всего исследования. При подозрении на острый сепсис рекомендуется проводить 2–3 последовательных исследования с интервалом в 30–60 минут.
Ключевые правила:
- Время: Кровь необходимо забирать строго во время подъема температуры (когда у пациента наблюдается озноб), а не на пике лихорадки.
- Асептика: Требуется тщательная обработка кожи над веной для исключения контаминации нормальной микрофлорой. Сначала кожу протирают 70% этиловым спиртом, затем обрабатывают 5% настойкой йода. Используется исключительно стерильный шприц.
- Объем: Для взрослого пациента необходимо получить не менее 10 мл крови, для детей достаточно 5 мл.
Техника посева и выбор питательных сред
Посев (инокуляция) должен выполняться экстренно: немедленно у постели больного или с максимально быстрой доставкой шприца в лабораторию. Перед проколом резиновой пробки флакона иглу обязательно меняют на новую стерильную, а саму крышку флакона дезинфицируют 70% спиртом в течение одной минуты. Все среды должны быть предварительно согреты до комнатной температуры.
Важнейшее условие — разведение крови. Материал вносят в среду в соотношении от 1:10 до 1:60. Это делается целенаправленно, чтобы преодолеть мощные естественные бактерицидные свойства крови (максимально разбавить фагоциты, антитела и систему комплемента), которые могут подавить рост возбудителя.
Для охвата всего спектра возможных патогенов используют набор различных сред:
- Жидкие питательные среды (основа для классического посева).
- Двухфазная (двойная) среда. Включает твердую фазу (скошенный питательный агар) и жидкую (полужидкий бульон с глюкозой). Кровь вносят в бульон, после чего аккуратно омывают им поверхность агара.
- Тиогликолевая среда (специфична для поиска анаэробов и микроаэрофилов).
- Среда Сабуро (жидкий вариант используется при подозрении на грибковый сепсис).
Инкубация, учет и интерпретация результатов
Флаконы с посевами помещают в термостат при температуре 37 °C и просматривают ежедневно. При использовании двухфазной среды лаборанту достаточно просто наклонить флакон, смачивая агар бульоном: если возбудитель есть, на скошенном агаре визуализируются колонии. Это избавляет от необходимости вскрывать емкость для пересева и существенно снижает риск случайного загрязнения из воздуха.
Алгоритм выдачи ответов:
- При положительном результате (появлении роста) немедленно проводится идентификация микроорганизма и ставится антибиотикограмма.
- Предварительный отрицательный ответ может быть выдан на 9–10-е сутки.
- Окончательный отрицательный результат формируется только после инкубации в течение 4–6 недель. Столь долгий срок необходим для исключения наличия в крови медленнорастущих бактерий.
Оценка достоверности: Любой рост расценивается как патология (бактериемия). Однако всегда существует риск ошибок. Ложноположительные результаты возникают при контаминации флорой кожи пациента или из внешней среды на этапе забора. Ложноотрицательные ответы часто связаны с тем, что возбудитель в русле есть, но не растет из-за недостаточного разведения и сохранения бактерицидных свойств крови. Истинной бактериемией считается ситуация, когда при сравнении результатов из разных локусов одного пациента выделяются абсолютно идентичные штаммы микроорганизмов.
Коротко: ответы на вопросы по теме
Какие конкретно виды микроорганизмов чаще всего вызывают ложноположительные результаты посева из-за контаминации с кожи?
Ложноположительные результаты посева крови из-за контаминации кожной микрофлорой могут быть связаны с:
- Коагулазанегативными стафилококками (преимущественно Staphylococcus epidermidis).
- Коринеформными бактериями (Corynebacterium spp.).
Какие виды медленнорастущих бактерий требуют длительной инкубации гемокультур до 4–6 недель?
Длительная инкубация гемокультур (до 4–6 недель) необходима для выявления медленнорастущих микроорганизмов. В источниках указаны следующие виды бактерий, требующие продолжительного культивирования:
- Микобактерии туберкулеза (M. tuberculosis) — время культивирования составляет 3–4 недели.
- Бруцеллы (Brucella spp.) — первичный посев инкубируют до 30 дней из-за медленной скорости роста.
По каким визуальным признакам лаборант определяет рост бактерий во флаконе с классической жидкой средой?
Лаборант определяет рост бактерий в классической жидкой питательной среде по нескольким визуальным изменениям. К основным признакам относятся:
- Помутнение среды — может быть равномерным (диффузным) или сопровождаться образованием осадка.
- Образование пленки — поверхностный рост, например, в виде серовато-серебристой пленки.
- Появление осадка — формирование пристеночного, придонного, крошкообразного или мелкозернистого осадка.
- Газообразование — активное или интенсивное выделение пузырьков газа.
По каким критериям доказывают истинную бактериемию и отличают ее от контаминации?
Истинную бактериемию отличают от контаминации на основании следующих критериев:
- Сравнение с посевами из других локусов у того же пациента: выделение идентичных штаммов подтверждает диагноз.
- При выделении коагулазанегативных стафилококков или Corynebacterium spp. требуется подтверждение двумя положительными гемокультурами; повторный забор крови проводят максимально близко по времени к первому исследованию.
- Ложноположительный результат может быть связан с загрязнением образца микрофлорой кожи или питательной среды.
Запомните ключевое правило преаналитики: забор крови проводят на этапе озноба, а не на пике температуры. На высоте лихорадки бактерии могут интенсивно разрушаться, что приведет к ложноотрицательному результату.
Вопросы с занятий и экзамена
Зачем кровь разводят питательной средой в соотношении 1:10 и выше?
Это необходимо для преодоления естественных бактерицидных свойств крови. Разведение резко снижает концентрацию комплемента, специфических антител и фагоцитов, позволяя возбудителю размножаться in vitro.
В чем главное преимущество двухфазной питательной среды?
Она позволяет визуально обнаружить рост колоний на скошенном агаре без необходимости открывать флакон для рутинного пересева. Это значительно снижает риск случайной контаминации образца.
Как доказать, что выделенный микроб — причина сепсиса, а не случайное загрязнение?
Главный критерий истинности — сопоставление с посевами из других локусов этого же больного. Если выделен идентичный штамм, бактериемия подтверждается.
Что ещё разобрать по теме
- Механизмы естественной бактерицидности крови (роль комплемента и антител)
- Особенности работы с тиогликолевой средой при анаэробной инфекции
- Специфика культивирования грибов на среде Сабуро
- Тактика серийных заборов крови при остром сепсисе
Разберите тему целиком в курсе «Микробиология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Микробиологическое исследование крови» и ещё 4 383 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 141 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Клиническая микробиология»
Бесплатные видеоуроки: микробиологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.