Организация генетического материала
Гены, кодирующие молекулы иммуноглобулинов (Ig), представлены мозаичной структурой. Кодирующие участки разделены протяженными неинформативными нуклеотидными последовательностями.
Выделяют четыре основных типа генных сегментов:
- V-сегменты (Variable) — кодируют большую часть вариабельного домена.
- D-сегменты (Diversity) — сегменты разнообразия, присутствуют только в генах тяжелых цепей.
- J-сегменты (Joining) — соединительные участки.
- C-сегменты (Constant) — несут информацию о строении константных областей и определяют класс антитела (например, $C_\mu$ для IgM или $C_\gamma$ для IgG).
За счет случайного комбинирования этих фрагментов организм способен синтезировать миллионы различных вариантов антител, генерируя колоссальное разнообразие защитных молекул.
Синтез легких и тяжелых цепей
Формирование полноценного гена происходит в ДНК В-лимфоцита благодаря процессу соматической рекомбинации.
Сборка легкой цепи (на примере $\varkappa$-цепи):
- На уровне ДНК объединяются один вариабельный (V) и один соединительный (J) сегмент. Промежуточная ДНК между ними удаляется.
- Сформированный комплекс VJ сближается с константным C-сегментом.
- Происходит транскрипция с образованием пре-мРНК, которая содержит VJ-участок, лишние J-сегменты и C-область.
- В ходе сплайсинга (процессинга) вырезаются интроны и неиспользованные J-фрагменты, образуя зрелую мРНК.
Сборка тяжелой (H) цепи: Процесс усложняется наличием D-сегментов и требует двух этапов рекомбинации. Сначала собирается смешанный экзон из случайных D- и J-сегментов. Затем к полученному DJ-комплексу присоединяется один из $V_H$-сегментов. Итоговый $V_H D_H J_H$-экзон располагается рядом с константным участком, после чего начинается транскрипция.
Переключение классов иммуноглобулинов
При первичном иммунном ответе В-лимфоциты всегда начинают с синтеза IgM. Это связано с тем, что ген $C_\mu$-сегмента физически расположен на 5'-конце кодирующей области ДНК, то есть идет самым первым перед всеми остальными константными генами.
По мере дифференцировки клеток происходит переключение на другие классы (IgG, IgA и т.д.). Этот процесс осуществляется за счет дополнительной специфической рекомбинации. Ферментные системы удаляют С-сегменты, которые находятся между собранным вариабельным геном и С-областью того класса иммуноглобулина, который должен синтезироваться новым.
Альтернативный сплайсинг: от мембраны к секреции
Иммуноглобулины могут существовать как в виде рецепторов на мембране клетки, так и в виде свободных молекул в крови. Регуляция этого процесса зависит от альтернативного сплайсинга и полиаденилирования первичного транскрипта.
- В пре-В-лимфоцитах (мембранная форма): Синтезируется мРНК, включающая специфический экзон. Он кодирует гидрофобный участок в С-области, который работает как «якорь», надежно фиксируя молекулу IgM в клеточной мембране.
- В плазматических клетках (секреторная форма): В ходе терминальной дифференцировки транскрипция останавливается раньше — на стоп-кодоне внутри интрона. Благодаря альтернативному полиаденилированию экзон с гидрофобным участком исключается из зрелой мРНК. В результате образуются укороченные антитела без мембранного «якоря», которые секретируются в кровоток.
Коротко: ответы на вопросы по теме
Какие ферменты (рекомбиназы) осуществляют V(D)J-рекомбинацию?
V(D)J-рекомбинация запускается экспрессией генов V(D)J-рекомбинационного комплекса. По источникам комплекс включает 6 компонентов:
- димер рекомбиназ (экзонуклеаз) RAG-1/RAG-2;
- ДНК-зависимую протеинкиназу;
- ДНК-лигазу IV;
- терминальную дезоксинуклеотидилтрансферазу (TdT), связанную с нематричным синтезом олигодезоксинуклеотидов / нематричным добавлением нуклеотидов;
- гетеродимер HMG 1/2;
- гетеродимер Ku70/Ku80.
На этапе синапса RAG-1 и RAG-2 присоединяются к концам последовательностей 12 и 23 соединяемых участков гена, димеризуются и сближают участки. Разрыв двух нитей ДНК катализируется рекомбиназой RAG. Сближению участков способствует HMG1/2.
Какие дополнительные механизмы (кроме VDJ-рекомбинации) обеспечивают разнообразие антител?
Разнообразие антител, кроме самой рекомбинации / комбинаторики сегментов ДНК, обеспечивается следующими механизмами:
- неточность соединения сегментов: неточная локализация разрывов цепей ДНК при реаранжировке V-, D- и J-сегментов;
- вставка нуклеотидов в места соединения: P- и N-вставки, добавление лишних нуклеотидов на стыках;
- использование 3 рамок считывания в D-сегменте, что дает троекратное увеличение вариабельности;
- соматические гипермутации V-генов.
Какие классы антител могут образовываться в процессе переключения изотипов после IgM?
В процессе переключения изотипов после синтеза первичного IgM могут образовываться другие классы антител за счет специфической рекомбинации ДНК под влиянием цитокинов. К ним относятся:
- Иммуноглобулины G (IgG) — формируются подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
- Иммуноглобулины A (IgA) — формируются подклассы IgA1 и IgA2.
- Иммуноглобулины E (IgE) — синтезируются, например, под влиянием интерлейкина-4.
Переключение происходит за счет удаления константных С-сегментов, находящихся между сформированным вариабельным геном и С-областью нового изотипа.
Легко запомнить хромосомы для цепей антител: каппа — 2, тяжелые — 14, лямбда — 22. Они образуют последовательность с шагом примерно в десяток: 2, 14, 22.
Вопросы с занятий и экзамена
Почему при первичном ответе синтезируется именно IgM?
Ген сегмента $C_\mu$, который кодирует константную область иммуноглобулина М, расположен на 5'-конце ДНК. Он находится физически первым перед всеми остальными С-сегментами.
Чем сборка тяжелой цепи отличается от легкой?
В тяжелой цепи присутствуют дополнительные D-сегменты (разнообразия). Поэтому рекомбинация идет в два этапа: сначала сливаются D и J, а только потом к ним добавляется V-сегмент.
Как В-лимфоцит начинает выделять антитела в кровь вместо фиксации их на мембране?
При дифференцировке в плазмоцит меняется процессинг мРНК. Из-за остановки на раннем стоп-кодоне вырезается экзон, кодирующий гидрофобный «якорь», и молекула становится растворимой.
Что ещё разобрать по теме
- Механизм альтернативного сплайсинга на примере гена кальцитонина
- Роль стоп-кодонов в процессинге пре-мРНК
- Посттрансляционная модификация и присоединение олигосахаридов
- Статистика и количество V, D, J сегментов в геноме человека
Разберите тему целиком в курсе «Биохимия»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Гены иммуноглобулинов» и ещё 3 574 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 115 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Матричные биосинтезы»
Бесплатные видеоуроки: биохимияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.