Виды гистологических препаратов
В зависимости от способа подготовки выделяют четыре основных типа препаратов:
- Срезы. Тонкие пластинки органов. Это самый частый вариант в практике.
- Мазки. Применяются для изучения жидких сред (например, крови или костного мозга).
- Отпечатки. Получают путем прикладывания органа (допустим, селезенки) к предметному стеклу.
- Пленочные (тотальные) препараты. Представляют собой цельные фрагменты тонких структур, таких как брюшина или мягкая мозговая оболочка.
Стандартный алгоритм создания среза
Создание гистологического среза — строго регламентированный процесс, состоящий из пяти последовательных шагов:
- Взятие и фиксация материала. Из органа вырезают фрагмент (около $0,5 \times 1 \times 1$ см) и погружают его в фиксирующий раствор (формалин, метанол). Фиксация длится сутки и предотвращает аутолиз (самопереваривание) за счет денатурации белков. После этого образец промывают водой.
- Обезвоживание и уплотнение. Чтобы ткань стала твердой для резки, ее пропитывают парафином или смолами. Так как парафин гидрофобен, ткань сначала обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации (от 70% до 100%), затем спирт вытесняют ксилолом. После этого материал заливают жидким парафином (52–56 °C), который при остывании образует твердый блок.
- Микротомия (резка). Блок закрепляют в микротоме. Прибор срезает тонкие слои (например, 7 мкм), которые затем расправляют в теплой воде и переносят на предметное стекло.
- Окрашивание. Перед нанесением водорастворимого красителя ткань нужно депарафинизировать: парафин удаляют ксилолом, а воду возвращают проводкой через спирты убывающей концентрации. После окраски препарат промывают водой.
- Консервация. Для длительного хранения срез снова обезвоживают и просветляют (карбол-ксилолом и ксилолом). Затем наносят консервирующую среду (чаще всего канадский бальзам), чей коэффициент преломления близок к стеклу, и накрывают покровным стеклом.
Особенности других методов
Помимо классических парафиновых срезов, существуют и другие подходы:
- Экспресс-диагностика. Применяется во время операций или для гистохимии. Образец замораживают (жидким азотом или углекислотой) и режут в криостате. Это позволяет обойтись без фиксации, спиртовой проводки и заливки, получая результат немедленно.
- Тотальные препараты и мазки. При их подготовке пропускают этапы уплотнения и резки. Цикл включает только фиксацию, окраску и заключение. При этом мазки часто консервируют не канадским бальзамом, а кедровым маслом.
Коротко: ответы на вопросы по теме
Какие фиксирующие жидкости применяются для приготовления гистологических препаратов?
Для фиксации гистологических препаратов применяются простые и сложные фиксирующие жидкости, предотвращающие разложение и аутолиз тканей. К применяемым растворам относятся:
- Простые фиксаторы — формалин, спирт (метанол), кислоты и соли тяжелых металлов. Для специфической фиксации жиров и миелиновых нервных волокон используется осмиевая кислота.
- Сложные фиксаторы — представляют собой различные смеси простых фиксирующих жидкостей.
Какие красители чаще всего используются для обзорной окраски гистологических препаратов?
В источниках как стандартная окраска гистологических препаратов указана комбинация гематоксилина и эозина.
- Гематоксилин — основной краситель; базофильные структуры окрашиваются основными красителями. К ним относятся ядра клеток и рибосомы, а также аморфный компонент межклеточного вещества.
- Эозин — кислый краситель ярко-розового цвета; оксифильные структуры окрашиваются кислыми красителями. К ним относятся белки цитоплазмы, в том числе гемоглобин эритроцитов, и неклеточные структуры, например коллагеновые волокна.
Также в источниках перечислены другие красители: кислый фуксин, азур II, кармин и нейтральные красители; нейтральные красители представляют собой смесь основных и кислых красителей.
Какие среды применяются для заключения (консервации) гистологических препаратов?
Для заключения гистологических препаратов используются консервирующие среды; коэффициент преломления света такой среды должен быть близок к стеклу. В источниках указаны:
- Канадский бальзам — пример консервирующей среды для заключения среза под покровное стекло.
- Глицерин-желатин и полистирол — консервирующие среды для заключения срезов.
- Кедровое масло — для мазков часто используется вместо канадского бальзама.
Вопросы с занятий и экзамена
Для чего нужна фиксация материала?
Фиксация нужна для предотвращения аутолиза (самопереваривания) тканей клеточными ферментами. Фиксаторы вызывают денатурацию белков, сохраняя прижизненную структуру.
Почему перед заливкой в парафин ткань нужно обезвоживать?
Парафин обладает гидрофобными свойствами и не может проникнуть в ткань, содержащую воду. Поэтому воду сначала замещают спиртом, а затем промежуточным растворителем (ксилолом).
В чем суть экспресс-диагностики?
Это метод, при котором ткань быстро замораживают и режут в криостате. Он исключает длительные этапы фиксации и заливки, что позволяет быстро получить препарат прямо во время операции.
Что ещё разобрать по теме
- Механизмы химической денатурации белков при фиксации
- Свойства различных уплотняющих сред (целлоидин, синтетические смолы)
- Устройство и принцип работы микротома
- Виды красителей и механизмы их взаимодействия с тканями
- Подробный алгоритм гистохимических исследований
Разберите тему целиком в курсе «Гистология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Приготовление гистологических препаратов» и ещё 3 438 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 137 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Техника гистологического исследования»
Бесплатные видеоуроки: гистологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.