Общая характеристика и разновидности метода
В зависимости от того, какой именно микроорганизм необходимо найти, культуральный метод делится на несколько направлений:
- Бактериологический — поиск бактерий.
- Вирусологический — поиск вирусов.
- Микологический — поиск грибов.
- Паразитологический — поиск простейших.
Главное достоинство этого подхода — высокая информативность. Благодаря возможности накопить достаточную биомассу микроорганизмов, лаборатория может максимально точно идентифицировать вид возбудителя. Однако у метода есть недостатки: он требует серьезных трудозатрат и длительного ожидания результатов.
Иногда исследование дает ложноотрицательный результат. Это происходит по трем основным причинам: возбудитель физически не попал в пробу при заборе материала, микроб погиб во время транспортировки в лабораторию, либо в организме присутствуют специфические некультивируемые формы микроорганизмов.
Бактериологический метод: золотой стандарт
Бактериологическое исследование официально признано «золотым стандартом» лабораторной диагностики бактериальных инфекций. Его ключевая задача — выделить чистую культуру и опознать ее.
Идентификация проводится по комплексу свойств:
- Морфологические и тинкториальные (отношение к окраске).
- Культуральные (особенности роста на средах).
- Биохимические, токсигенные и антигенные.
Клиническое значение метода огромно. Он позволяет составить антибиотикограмму (определить чувствительность к препаратам) и проверить реакцию микробов на бактериофаги. Также важна количественная оценка бактерий: именно она помогает доказать этиологическую роль микроорганизма, то есть подтвердить, что он является причиной болезни, а не случайным транзиторным компонентом.
Эпидемиологическое значение метода заключается в эпидемиологическом маркировании — установлении источника инфекции. Для этого проводят внутривидовую идентификацию, разделяя бактерии одного вида на мелкие варианты: фаговары, биовары, серовары, хемовары и антибиотиковары.
Вирусологический метод
Это сложный и крайне длительный процесс, требующий наличия специализированной лаборатории. Исследование занимает более 7 дней и состоит из трех этапов.
Этап 1: Заражение (культивирование). Вирусы не растут на обычном агаре, поэтому для них используют чувствительные биологические модели: лабораторных животных, куриные эмбрионы или культуры живых клеток.
Этап 2: Индикация вируса. Специалистам необходимо обнаружить факт размножения возбудителя. При использовании животных оценивают клиническую картину и патологоанатомические изменения органов. В культуре клеток размножение вируса подтверждают следующие признаки:
- Цитопатическое действие (ЦПД) — повреждение и гибель клеток.
- Образование внутриклеточных включений.
- Гемадсорбция — прилипание эритроцитов к зараженным клеткам.
- Феномен бляшкообразования — появление «стерильных» пятен в сплошном клеточном слое.
- Изменение цвета индикатора питательной среды (так называемая цветная проба).
Этап 3: Идентификация вируса. Для определения точного вида используют иммунные реакции (РПГА, РТГА, РН, РСК, ИФА) и молекулярно-генетические методы (в первую очередь ПЦР).
Микологический и паразитологический методы
Для диагностики микозов применяется микологический метод. Исследуемый материал засевают на специальные среды. После того как удается выделить чистую культуру гриба, ее идентифицируют по трем группам свойств: морфологическим, культуральным и биохимическим. Обязательным этапом является определение чувствительности выделенного гриба к антимикотикам (противогрибковым препаратам).
Паразитологический метод основан на культивировании простейших на питательных средах с их последующей идентификацией. Важно отметить, что в рутинной клинической практике данный подход используется редко.
Коротко: ответы на вопросы по теме
Какие конкретно питательные среды используют для выделения чистой культуры грибов?
Для выделения чистой культуры грибов используют специальные и обычные питательные среды. К конкретным средам относятся:
- Среда Сабуро — применяется в виде агара или жидкой среды.
- Сусло-агар — используется для посева клинического материала, в том числе при диагностике кандидоза.
- Жидкое сусло — используется для лабораторного культивирования грибов.
- Среда Чапека — используется для лабораторного культивирования грибов.
На какие группы классифицируют питательные среды для бактериологического посева?
Питательные среды классифицируют в зависимости от состава и назначения. Выделяют:
- Простые среды.
- Сложные среды.
- Элективные (селективные) среды — подавляют рост сопутствующей микрофлоры.
- Среды обогащения (накопительные).
- Дифференциально-диагностические среды — предназначены для изучения ферментативной активности бактерий.
- Комбинированные среды — сочетают свойства элективных и дифференциально-диагностических сред.
- Среды для субкультивирования.
Какими методами определяют чувствительность бактерий к антибиотикам при составлении антибиотикограммы?
Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам и составления антибиотикограммы применяют:
- Диско-диффузионный метод — основан на диффузии антибиотика из бумажного диска в агар с образованием зоны задержки роста бактерий.
- Е-тест (градиентная диффузия) — использует полоску с градиентом концентраций препарата; по нему определяют минимальную ингибирующую концентрацию (МИК).
- Метод серийных разведений — позволяет определить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) и минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) в жидких средах.
- Тест-системы — применяются для определения пограничных концентраций или МПК.
Какие виды цитопатического действия (ЦПД) вирусов можно наблюдать в зараженной культуре клеток?
В заражённой культуре клеток могут наблюдаться:
- Цитопатическое действие.
- Образование внутриклеточных включений.
- Гемадсорбция — прилипание эритроцитов к заражённым клеткам.
- Феномен бляшкообразования — образование «стерильных» пятен в слое клеток.
- Симпластообразование — в частности, в клетках комара при культивировании флавивирусов.
- Изменение цвета индикатора питательной среды.
Для запоминания признаков индикации вируса в клеточной культуре используйте аббревиатуру ЦВБ-ГЦ: Цитопатическое действие, Включения, Бляшки, Гемадсорбция, Цветная проба.
Вопросы с занятий и экзамена
Почему культуральный метод может дать ложноотрицательный результат?
Такое происходит, если микроорганизм отсутствовал в месте забора биоматериала, погиб на этапе транспортировки в лабораторию, или если возбудитель относится к некультивируемым формам микроорганизмов.
Зачем нужно определять количество бактерий при посеве?
Количественная оценка помогает понять истинную этиологическую роль микроба. Это позволяет отличить реального возбудителя инфекционного процесса от бактерий, которые просто присутствуют в организме.
Что такое внутривидовая идентификация и для чего она нужна?
Это эпидемиологическое маркирование — разделение бактерий одного вида на мелкие варианты (серовары, фаговары, биовары). Оно критически важно для точного установления источника инфекции при эпидемиологических расследованиях.
Чем культивирование вирусов отличается от бактериального?
В отличие от бактерий, вирусы невозможно вырастить на искусственных питательных средах. Для их культивирования обязательно требуются живые биологические модели: культуры клеток, куриные эмбрионы или лабораторные животные.
Что ещё разобрать по теме
- Методы окраски бактерий и тинкториальные свойства микроорганизмов
- Правила постановки и чтения антибиотикограммы
- Серологические реакции для идентификации вирусов (РПГА, РСК, ИФА)
- Цитопатическое действие вирусов: виды и механизмы развития
- Особенности питательных сред для выращивания грибов
Разберите тему целиком в курсе «Микробиология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Культуральный метод диагностики» и ещё 4 383 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 141 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Микробиологическая диагностика»
Бесплатные видеоуроки: микробиологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.